CD4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419557

Descripción general

Cd4 codifica CD4, una glicoproteína transmembrana de tipo I expresada predominantemente en las células T colaboradoras y en un subconjunto de timocitos, donde actúa como correceptor que estabiliza el reconocimiento del MHC de clase II por el TCR y favorece la señalización dependiente de Lck. A través de su asociación con el complejo del TCR, CD4 contribuye a la selección tímica, a los umbrales de activación de las células T y a las vías posteriores que moldean la diferenciación hacia linajes efectores y reguladores. La alteración de la señalización dependiente de CD4 y de la homeostasis de las células T CD4+ es fundamental en la desregulación inmunitaria en contextos autoinmunes e inflamatorios, y los cambios en la función de las células T CD4+ también son relevantes para la inmunología tumoral y las interacciones huésped–patógeno. En modelos murinos, la perturbación de Cd4 se utiliza ampliamente para analizar la presentación de antígeno, la polarización impulsada por citocinas y el comportamiento de las redes inmunitarias adaptativas in vivo e in vitro.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd4 para la investigación de la señalización de CD4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cd4 críticos para la función de CD4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CD4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD4 (m) y el plásmido HDR CD4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.