Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD35: sc-401210-ACT

Le récepteur 1 du complément (CR1), également appelé CD35, est une glycoprotéine de surface cellulaire exprimée sur les érythrocytes, les leucocytes et les cellules dendritiques folliculaires. Il se lie aux opsonines du complément C3b et C4b afin de favoriser l’élimination des complexes immuns et de réguler l’amplification de la cascade du complément. En accélérant la dissociation des convertases C3/C5 et en agissant comme cofacteur du facteur I pour le clivage de C3b/C4b, CD35 module la signalisation de l’immunité innée, la phagocytose et la prise en charge des antigènes lors des réponses inflammatoires. La fonction de CR1 s’inscrit à l’interface des voies classique et alternative du complément, influençant la défense de l’hôte, le trafic des complexes immuns et les interactions avec les processus médiés par les récepteurs Fc. Des variations génétiques et d’expression de CR1 ont été associées à des modifications de la susceptibilité et de la physiopathologie dans l’inflammation induite par les complexes immuns, ainsi que dans des phénotypes neuro-inflammatoires et hématologiques liés au complément, ce qui étaye son intérêt comme cible mécanistique de recherche.

CD35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD35. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD35 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD35 dans les cellules tumorales présentant une expression de CR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.