Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD3-ζ/η (m): sc-419556

Présentation

Cd247 code la sous-unité de signalisation CD3ζ/η du complexe du récepteur des lymphocytes T (TCR), un adaptateur contenant un motif d’activation immunorécepteur basé sur des tyrosines (ITAM) qui couple la reconnaissance de l’antigène à des cascades de phosphorylation intracellulaires. Lors de l’engagement du TCR, les ITAM de CD3ζ/η recrutent et activent des kinases telles que LCK et ZAP70, favorisant l’assemblage du signalosome LAT/SLP-76 et l’activation en aval des voies MAPK, NF-κB et NFAT, qui contrôlent l’activation des lymphocytes T, la production de cytokines et la survie. Une expression ou une signalisation altérée de CD247 contribue à une diminution de la réactivité des lymphocytes T et à une dysrégulation immunitaire, et a été associée à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns ainsi qu’à l’échappement immunitaire tumoral au sein du microenvironnement. Chez la souris, la perturbation de Cd247 est largement utilisée pour disséquer la sélection thymique, la tolérance périphérique et les états effecteurs versus épuisés des lymphocytes T.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD3-ζ/η (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd247 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd247, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd247 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD3-ζ/η.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd247 pour l'étude de la signalisation de CD3-ζ/η, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cd247 essentiels à la fonction de CD3-ζ/η
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd247 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD3-ζ/η plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD3-ζ/η plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd247. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD3-ζ/η plasmide HDR (m) et le CD3-ζ/η (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd247 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd247 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.