Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) CD3-ζ: sc-400591-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD3-ζ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD3-ζ Double Nickase (h) et le plasmide CD3-ζ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CD247. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD3-ζ Antibody (6B10.2): sc-1239
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD3-ζ | sc-400591-NIC | 20 µg | $410.00 |
CD247 code la chaîne CD3-ζ (zêta), un composant de signalisation essentiel du complexe récepteur des lymphocytes T (TCR)–CD3, qui relie la reconnaissance de l’antigène à l’activation intracellulaire. Grâce aux motifs d’activation à base de tyrosine des immunorécepteurs (ITAM) présents dans son domaine cytoplasmique, CD3-ζ recrute et active des kinases telles que LCK et ZAP70, propageant des voies en aval incluant la signalisation LAT/SLP-76, MAPK, NF-κB et NFAT, afin de contrôler l’activation des lymphocytes T, leur prolifération et leur différenciation effectrice. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de CD247 ont été associées à une dérégulation immunitaire et sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que l’auto-immunité, les infections chroniques et le dysfonctionnement des lymphocytes T associé aux tumeurs. Ainsi, CD3-ζ constitue un levier moléculaire majeur pour analyser l’intensité du signal du TCR, les seuils d’activation et les mécanismes d’épuisement des lymphocytes T dans les cellules immunitaires humaines.
CD3-ζ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD247 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD247. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD247. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD247.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.