Plasmide Double Nickase (h) CD3-γ: sc-402537-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD3-γ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD3-γ Double Nickase (h) et le plasmide CD3-γ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CD3G. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD3-γ Antibody (H-7): sc-393271
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD3-γ | sc-402537-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD3-γ | sc-402537-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD3G code la sous-unité CD3-γ du complexe récepteur des cellules T (TCR)–CD3, un composant essentiel à l’activation des lymphocytes T dépendante de l’antigène et à la propagation du signal. CD3-γ contribue à l’assemblage du TCR, à son expression à la surface cellulaire et à l’initiation de la signalisation en aval via le recrutement, médié par les ITAM, de kinases se connectant à des voies telles que LCK/ZAP70, MAPK, NF-κB et NFAT. Par ces cascades, CD3-γ influence le développement des thymocytes, la sélection des lymphocytes T et les fonctions effectrices, notamment la production de cytokines. Des altérations de l’expression ou de la fonction de CD3G sont pertinentes pour l’étude de la dérégulation immunitaire, des phénotypes d’immunodéficience des lymphocytes T et des mécanismes qui régissent l’intensité de la signalisation du TCR et la tolérance.
CD3-γ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD3G dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD3G. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD3G. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD3G.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.