Particules Lentivirales d'Activation (h) CD3-ε: sc-400240-LAC

CD3E code la protéine CD3-ε, une sous-unité essentielle du complexe TCR‑CD3 (récepteur des lymphocytes T) qui soutient le développement des lymphocytes T, l’assemblage du TCR dépendant de l’antigène et la transduction du signal à la membrane plasmique. Via la signalisation fondée sur les motifs ITAM (immunoreceptor tyrosine-based activation motifs) présents sur les chaînes CD3 associées, CD3-ε contribue à initier des cascades de kinases impliquant LCK et ZAP70, conduisant à l’activation en aval des voies MAPK, NF‑κB et NFAT, qui régulent la production de cytokines et la différenciation des lymphocytes T. Une expression ou une fonction altérée de CD3E est associée à des défauts de sélection des thymocytes et à une réponse immunitaire adaptative diminuée ; le gène est fréquemment étudié dans les contextes d’immunodéficience, de dérégulation immunitaire et d’immunologie tumorale.

Les particules d'activation lentivirales CD3-ε (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CD3E dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD3-ε (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CD3E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD3-ε. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CD3E ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.