Plasmide Double Nickase (h) CD3-ε: sc-400240-NIC

CD3E code pour CD3-ε, un composant essentiel du complexe récepteur des cellules T (TCR)–CD3, qui couple la reconnaissance de l'antigène à la transduction du signal intracellulaire. CD3-ε contribue à l'assemblage du complexe TCR et à son expression à la surface cellulaire et, via les modules de signalisation ITAM associés au CD3, favorise l'activation des kinases proximales et des voies en aval, notamment LCK/ZAP70, la formation du signalosome LAT, les flux de calcium, MAPK, NF-κB et les programmes transcriptionnels NFAT. En modulant la sélection des thymocytes, les seuils d'activation des cellules T et la production de cytokines, CD3-ε est central pour l'homéostasie de l'immunité adaptative. Une altération de la fonction de CD3E est pertinente pour l'étude des phénotypes d'immunodéficience des cellules T, des anomalies de signalisation lymphocytaire et des mécanismes à l'origine de la dysrégulation immunitaire.

CD3-ε Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD3E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD3E. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD3E. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD3E.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.