Plasmide Double Nickase (h) CD28: sc-401525-NIC

CD28 code un récepteur co‑stimulatoire exprimé à la surface des lymphocytes T, qui coopère avec la signalisation du récepteur des cellules T (TCR) pour favoriser l’activation, la prolifération, la production de cytokines et la survie. La liaison de CD28 à CD80/CD86 sur les cellules présentatrices d’antigène amplifie la signalisation PI3K–AKT–mTOR, soutient l’activation des voies NF‑κB et MAPK et renforce la transcription d’IL‑2, orientant la différenciation des effecteurs et la formation de la mémoire. L’activité de CD28 contribue à l’équilibre entre tolérance immunitaire et réactivité, et des altérations de cette signalisation sont associées à une activation aberrante des lymphocytes T et à des pathologies d’origine immunitaire. Comme CD28 est au cœur du contrôle des points de contrôle co‑stimulatoires, il est largement étudié dans des contextes tels que l’auto‑immunité, l’inflammation chronique, les infections et l’immunologie des tumeurs.

CD28 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD28 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD28. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD28. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD28.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.