Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD27L: sc-402625-ACT

Le CD70 humain (CD27L) est un membre de la superfamille des ligands du TNF, de type II transmembranaire, exprimé principalement sur les cellules présentatrices d’antigènes activées ainsi que sur certains sous-ensembles de lymphocytes. En se liant au CD27 exprimé par les lymphocytes T et B et par les cellules NK, le CD70 soutient une signalisation co-stimulatrice qui module l’expansion clonale, la survie et la différenciation, influençant les réponses des centres germinatifs et la mémoire immunologique. Cet axe s’intègre aux programmes transcriptionnels liés à NF-κB et aux MAPK en aval de la signalisation de la famille des récepteurs du TNF, et contribue à la production de cytokines ainsi qu’à la fonction effectrice cytotoxique. Une expression dérégulée de CD70 a été associée à des modifications de l’activation immunitaire et à des phénotypes d’échappement immunitaire dans de multiples contextes de recherche en inflammation et en oncologie, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’immunologie tumorale et de l’homéostasie immunitaire.

CD27L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD70 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD27L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD70 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD70, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD27L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD70 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD27L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD27L dans les cellules tumorales présentant une expression de CD70 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.