Plasmide Double Nickase (h) CD274/PD-L1: sc-401140-NIC

CD274 code PD-L1, un ligand immunorégulateur transmembranaire de type I qui se lie à PD-1 (PDCD1) et module la signalisation du récepteur des cellules T afin de limiter l’activation effectrice et la production de cytokines. L’expression de PD-L1 est induite par des signaux inflammatoires, en particulier la voie JAK/STAT activée par l’IFN-γ, et s’intègre aux programmes de présentation de l’antigène et de gènes stimulés par les interférons pour façonner la surveillance immunitaire. Dans les tissus humains et les modèles de maladie, une dérégulation de PD-L1 contribue à des phénotypes d’échappement immunitaire, à des interactions tumeur–système immunitaire altérées et à des microenvironnements inflammatoires chroniques. CD274/PD-L1 est donc largement étudié dans les voies reliant la détection innée, les points de contrôle immunitaires adaptatifs et les réponses au stress intrinsèques aux cellules.

CD274/PD-L1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD274 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD274. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD274. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD274.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.