Plásmido CRISPR de Activación (h) CD274/PD-L1: sc-401140-ACT

CD274 codifica el ligando del punto de control inmunitario PD-L1, una glucoproteína de superficie celular que se une a PD-1 (PDCD1) en células T activadas para atenuar la señalización del TCR, la producción de citocinas y la función citotóxica. La expresión de PD-L1 está regulada por señales inflamatorias y oncogénicas, incluida la señalización IFN-γ–JAK/STAT y vías como PI3K/AKT y NF-κB, lo que configura la resistencia inmunitaria adaptativa en los microambientes tisulares. La desregulación de CD274/PD-L1 contribuye al escape inmunitario en múltiples tipos de cáncer y también se ha implicado en la regulación inmunitaria asociada a infecciones crónicas y a la autoinmunidad mediante la modulación de la presentación de antígenos y de programas de agotamiento de células T. Como nodo medible en la señalización inmunitaria, PD-L1 se estudia con frecuencia en sistemas de cocultivo tumor–inmune, ensayos de respuesta al interferón y análisis de vías para desentrañar la regulación de los puntos de control.

CD274/PD-L1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD274 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD274/PD-L1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD274 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD274, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD274/PD-L1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD274 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD274/PD-L1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD274/PD-L1 en células tumorales con expresión de CD274 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.