Plasmide Double Nickase (m) CD24: sc-419540-NIC

Cd24a code la protéine de surface CD24 ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI), une molécule immunomodulatrice fortement glycosylée exprimée sur plusieurs types de cellules hématopoïétiques et épithéliales chez la souris. CD24 participe aux interactions cellule–cellule et au réglage des réponses immunitaires innées et adaptatives, en influençant l’activation des leucocytes, les dynamiques d’adhérence et les programmes de différenciation. Par une signalisation dépendante des ligands et son association à des microdomaines membranaires, CD24 peut moduler les cascades de signalisation inflammatoire et affecter des processus tels que la réponse aux antigènes et l’homéostasie tissulaire. Une expression dérégulée de Cd24a a été associée à une régulation immunitaire altérée et à une plasticité cellulaire accrue dans des contextes pertinents pour les maladies, ce qui soutient son utilisation comme levier moléculaire pour étudier des phénotypes associés à l’inflammation et les interactions tumeur–système immunitaire dans des modèles murins.

CD24 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cd24a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cd24a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cd24a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cd24a.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.