Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD24: sc-418762-ACT

CD24 code une protéine de surface cellulaire ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI), fortement glycosylée, qui module les interactions cellule–cellule et cellule–matrice et façonne la signalisation immunitaire. CD24 participe à des processus tels que l’activation des lymphocytes, la dynamique d’adhésion et la régulation des réponses inflammatoires via des interactions avec des lectines de type immunoglobuline se liant à l’acide sialique, influençant des points de contrôle de l’immunité innée et des programmes de signalisation en aval. Son expression est régulée au cours du développement et souvent associée à des états de lignée épithéliale et hématopoïétique, ce qui en fait un marqueur utile de la différenciation cellulaire et de l’hétérogénéité phénotypique. Des altérations de l’abondance de CD24 ont été associées à des contextes de dérégulation immunitaire et de biologie tumorale, ce qui soutient des études mécanistiques de l’échappement immunitaire, de traits liés aux métastases et des interactions croisées avec le microenvironnement dans des systèmes modèles.

CD24 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD24 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD24 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD24 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD24, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD24. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD24 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD24 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD24 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD24 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.