CD203c Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431648

Descripción general

Enpp3 codifica la ectonucleótido pirofosfatasa/fosfodiesterasa 3 (CD203c), una ectoenzima de superficie celular que hidroliza nucleótidos extracelulares para regular la señalización purinérgica y el equilibrio entre mediadores proinflamatorios y antiinflamatorios. En células inmunitarias de ratón, CD203c contribuye al metabolismo de nucleótidos extracelulares, lo que puede influir en vías dependientes de adenosina/ATP que determinan umbrales de activación, migración y respuestas de citocinas. Su expresión se asocia comúnmente a la biología de basófilos y mastocitos, donde puede modular programas vinculados a la desgranulación y las salidas de señalización próximas al receptor. El procesamiento desregulado de nucleótidos extracelulares y los estados de activación inmunitaria asociados a CD203c son relevantes en modelos de inflamación tipo alérgica y otros fenotipos mediados por el sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD203c (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Enpp3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Enpp3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Enpp3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD203c.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Enpp3 para la investigación de la señalización de CD203c, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Enpp3 críticos para la función de CD203c
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Enpp3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CD203c CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD203c CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Enpp3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD203c (m) y el plásmido HDR CD203c (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Enpp3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Enpp3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.