Plásmido CRISPR de Activación (h) CD1D: sc-402435-ACT

CD1D codifica CD1d, una molécula presentadora de antígenos no clásica, similar al MHC de clase I, que se une a antígenos lipídicos y glucolipídicos y los exhibe en la superficie celular para su reconocimiento por las células T asesinas naturales invariantes (iNKT). Al modular la activación de las iNKT y los programas de citocinas posteriores, CD1d contribuye a la vigilancia inmunitaria, la tolerancia y la regulación de la inflamación en distintos tejidos. La presentación de antígenos lipídicos dependiente de CD1d se entrecruza con el tráfico endosomal, el procesamiento de antígenos y vías de señalización de linfocitos de tipo innato que influyen en la inmunología tumoral, la biología de las infecciones y los estados inflamatorios crónicos. La expresión o función alteradas de CD1D se han asociado con respuestas inmunitarias desreguladas observadas en la autoinmunidad, la inflamación metabólica y los microambientes tumorales.

CD1D El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD1D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD1D El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD1D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD1D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD1D. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD1D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD1D en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD1D en células tumorales con expresión de CD1D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.