Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD1D: sc-402435-ACT

CD1D code pour CD1d, une molécule de présentation d’antigènes non classique de type CMH de classe I, qui se lie aux antigènes lipidiques et glycolipidiques et les expose à la surface cellulaire pour leur reconnaissance par les cellules T tueuses naturelles invariantes (iNKT). En modulant l’activation des iNKT et les programmes de cytokines en aval, CD1d contribue à la surveillance immunitaire, à la tolérance et à la régulation de l’inflammation dans divers tissus. La présentation d’antigènes lipidiques dépendante de CD1d s’entrecroise avec le trafic endosomal, le traitement des antigènes et des voies de signalisation de lymphocytes de type inné, qui influencent l’immunologie des tumeurs, la biologie des infections et les états inflammatoires chroniques. Une expression ou une fonction altérée de CD1D a été associée à une dérégulation des réponses immunitaires observée dans l’auto-immunité, l’inflammation métabolique et les microenvironnements tumoraux.

CD1D Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD1D sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD1D Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD1D dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD1D, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD1D. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD1D natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD1D au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD1D dans les cellules tumorales présentant une expression de CD1D silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.