Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD1A: sc-401734-ACT

CD1A code une molécule de présentation d’antigènes non classique, apparentée au CMH de classe I, fortement exprimée sur les cellules dendritiques, notamment les cellules de Langerhans, où elle se lie à des antigènes lipidiques et glycolipidiques et les présente aux lymphocytes T. En modulant la présentation des antigènes lipidiques et l’amorçage des lymphocytes T, CD1A contribue à la surveillance immunitaire au niveau des barrières épithéliales et influence des programmes de cytokines qui modulent les réponses immunitaires adaptatives. Une expression altérée de CD1A et l’activité de lymphocytes T restreints par CD1A ont été associées à des dermatoses inflammatoires et à une dysrégulation immunitaire, et CD1A est fréquemment utilisé comme marqueur des états de différenciation et de maturation des cellules dendritiques. En recherche biomédicale, la perturbation de CD1A aide à disséquer les voies immunologiques dépendantes des lipides et la fonction des cellules présentatrices d’antigènes dans des systèmes humains.

CD1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD1A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD1A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD1A dans les cellules tumorales présentant une expression de CD1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.