Plásmido CRISPR de Activación (h) CD1A: sc-401734-ACT

CD1A codifica una molécula presentadora de antígenos no clásica, similar al MHC de clase I, que se expresa de manera destacada en las células dendríticas, incluidas las células de Langerhans, donde se une a antígenos lipídicos y glucolipídicos y los presenta a los linfocitos T. Al moldear la presentación de antígenos lipídicos y el cebado de linfocitos T, CD1A contribuye a la vigilancia inmunitaria en las barreras epiteliales e influye en programas de citocinas que modulan las respuestas inmunitarias adaptativas. La expresión alterada de CD1A y la actividad de linfocitos T restringidos por CD1A se han asociado con trastornos inflamatorios de la piel y con desregulación inmunitaria, y CD1A se utiliza con frecuencia como marcador de estados de diferenciación y maduración de las células dendríticas. En investigación biomédica, la perturbación de CD1A ayuda a dilucidar vías inmunológicas impulsadas por lípidos y la función de las células presentadoras de antígeno en sistemas humanos.

CD1A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD1A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD1A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD1A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD1A en células tumorales con expresión de CD1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.