CD163 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400435-ACT

CD163 kodiert einen auf Makrophagen beschränkten Scavenger-Rezeptor der SRCR-Familie, der Hämoglobin–Haptoglobin-Komplexe bindet und deren Endozytose vermittelt und so die Häm-Entgiftung mit antioxidativen sowie eisenregulierenden Programmen verknüpft. CD163 ist auf Monozyten und Gewebemakrophagen angereichert und mit einer antiinflammatorischen Polarisierung assoziiert; dabei moduliert es Zytokin-Signalnetzwerke wie IL‑10‑abhängige Signalwege und Antworten auf Stimuli der angeborenen Immunität. Durch die Steuerung der Clearance von extrazellulärem Hämoglobin und die Umgestaltung des Entzündungstonus beeinflusst CD163 Makrophagen-Aktivierungszustände in Infektionen, Atherosklerose und tumorassoziierten Mikroumgebungen. Eine veränderte CD163-Expression wird in Studien zu chronischer Entzündung und Immundysregulation häufig als Marker für Makrophageninfiltration und -phänotyp verwendet.

CD163 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD163-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD163 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD163-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD163-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD163-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD163-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD163-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD163-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD163-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.