Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD16: sc-400544-ACT

FCGR3A code pour CD16 (FcγRIIIa), un récepteur du fragment Fc des IgG à affinité faible à intermédiaire, fortement exprimé par les cellules NK (natural killer) et par certains sous-ensembles de monocytes/macrophages. CD16 s’associe à des chaînes adaptatrices portant des motifs ITAM (FCER1G et CD247) pour initier des cascades de signalisation impliquant SYK, PI3K/AKT, PLCγ et MAPK, intégrant la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC), la production de cytokines et la gestion des complexes immuns. Ce récepteur contribue à l’activation de l’immunité innée, à la régulation de l’inflammation et au dialogue avec les programmes de l’interféron et de NF-κB qui façonnent la fonction des cellules effectrices. Des altérations de l’activité de FCGR3A et de son expression à la surface cellulaire ont été associées à des réponses immunitaires dérégulées dans l’auto-immunité, l’inflammation chronique, les infections et l’immunologie des tumeurs, ce qui soutient des études mécanistiques dans des modèles de cellules immunitaires humaines.

CD16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FCGR3A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FCGR3A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FCGR3A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD16. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FCGR3A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD16 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD16 dans les cellules tumorales présentant une expression de FCGR3A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.