CD16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400544-ACT

FCGR3A codifica o CD16 (FcγRIIIa), um recetor de afinidade baixa a intermédia para a região Fc de IgG, expresso de forma proeminente em células natural killer e em subpopulações de monócitos/macrófagos. O CD16 associa-se a cadeias adaptadoras com ITAM (FCER1G e CD247) para iniciar cascatas de sinalização que envolvem SYK, PI3K/AKT, PLCγ e MAPK, integrando a citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC), a produção de citocinas e o processamento de complexos imunes. Este recetor participa na ativação da imunidade inata, na regulação inflamatória e na comunicação cruzada com programas de interferão e NF-κB que moldam a função das células efetoras. Alterações na atividade e na expressão à superfície celular de FCGR3A têm sido associadas a respostas imunitárias desreguladas na autoimunidade, inflamação crónica, infeção e imunologia tumoral, apoiando estudos mecanísticos em modelos de células imunitárias humanas.

CD16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FCGR3A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FCGR3A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FCGR3A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FCGR3A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD16 em células tumorais com expressão de FCGR3A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.