Plasmide CRISPR d'Activation (m) CD155: sc-424585-ACT

Le gène murin **Pvr** code **CD155**, une molécule d’adhérence de la superfamille des immunoglobulines qui sert de ligand à **DNAM‑1 (CD226)** ainsi qu’à des récepteurs inhibiteurs tels que **TIGIT** et **CD96**, modulant la formation de la synapse immunologique et l’activité des lymphocytes cytotoxiques. **CD155** soutient également l’adhérence et la motilité cellulaires via des interactions avec la matrice extracellulaire et des régulateurs du cytosquelette, en lien avec des processus qui influencent le remodelage tissulaire et l’inflammation. Dans le système nerveux, elle est connue comme un homologue du récepteur du poliovirus et contribue à la dynamique des contacts cellule–cellule. Une expression dérégulée de **CD155** est fréquemment étudiée dans le contexte de l’immunologie des tumeurs, des interactions virales et des mécanismes d’échappement immunitaire, faisant de **Pvr** un nœud utile pour explorer la signalisation des immunorécepteurs et la régulation du microenvironnement dans des modèles murins.

CD155 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pvr sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD155 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pvr dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pvr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD155. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pvr natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD155 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD155 dans les cellules tumorales présentant une expression de Pvr silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.