Plasmide Double Nickase (h) CD154: sc-401682-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD154 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD154 Double Nickase (h) et le plasmide CD154 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CD40LG. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD154 Antibody (F-1): sc-374635
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD154 | sc-401682-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD154 | sc-401682-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD40LG code pour CD154 (ligand de CD40), une protéine membranaire de type II exprimée de façon transitoire à la surface des lymphocytes T CD4+ activés. Elle se lie à CD40 sur les lymphocytes B, les cellules dendritiques et les macrophages afin de coordonner le dialogue entre immunité adaptative et immunité innée. La signalisation CD154–CD40 favorise l’activation des cellules B, la formation des centres germinatifs, la recombinaison de commutation de classe des immunoglobulines, ainsi que la « licensing » (maturation fonctionnelle) des cellules dendritiques via des programmes transcriptionnels pilotés par NF-κB et les voies MAPK. Cet axe module également la production de cytokines et les signaux de co‑stimulation au sein des réponses des lymphocytes T auxiliaires folliculaires, ainsi que les voies de présentation de l’antigène. Une activité ou une expression dérégulée de CD40LG est associée à des phénotypes de déficit immunitaire et d’hyperactivation immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’immunité humorale, de l’inflammation et de la régulation du microenvironnement lymphoïde.
CD154 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD40LG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD40LG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD40LG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD40LG.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.