Plasmide Double Nickase (h) CD14: sc-400344-NIC

CD14 code un récepteur de reconnaissance des motifs (PRR) ancré par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), exprimé principalement à la surface des monocytes, des macrophages et des neutrophiles, où il agit comme co‑récepteur du lipopolysaccharide (LPS) bactérien et d'autres ligands microbiens. En présentant ces ligands au complexe TLR4/MD‑2, CD14 amplifie la signalisation de l'immunité innée, ce qui active les voies NF‑κB et MAPK et induit la production de cytokines et de chimiokines. La détection dépendante de CD14 s'articule aussi avec le trafic endocytique et contribue à des programmes inflammatoires associés à l'inflammasome. Une signalisation CD14 dérégulée ainsi que le relargage de CD14 soluble sont impliqués dans la physiopathologie du sepsis, des états inflammatoires chroniques et des mécanismes de maladies cardiométaboliques et neuro‑inflammatoires, faisant de CD14 une cible fréquemment étudiée dans les travaux sur les interactions hôte–pathogène et l'activation immunitaire.

CD14 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD14.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.