Plasmide Double Nickase (h) CD137: sc-405068-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD137 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD137 Double Nickase (h) et le plasmide CD137 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TNFRSF9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD137 Antibody (BBK-2): sc-58947
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD137 | sc-405068-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD137 | sc-405068-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFRSF9 (CD137, 4-1BB) est un membre inductible de la superfamille des récepteurs du TNF, exprimé sur les lymphocytes T activés, les cellules NK et d’autres sous-populations immunitaires, où il agit comme un point de contrôle co‑stimulatoire régulant l’activation, la survie et la différenciation effectrice. L’engagement de CD137 par son ligand déclenche le recrutement d’adaptateurs et l’activation en aval des voies de signalisation NF‑κB, MAPK et PI3K/AKT, soutenant la production de cytokines, la prolifération et la forme physique métabolique. Cette voie module les interactions cellule immunitaire–cellule immunitaire au sein des tissus inflammatoires et du microenvironnement tumoral, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de l’inflammation chronique, de l’auto-immunité et de l’immunobiologie des cancers. Des modifications de l’expression de TNFRSF9 ou de la dynamique de sa signalisation peuvent influencer les réponses cytotoxiques et les états d’épuisement immunitaire, ce qui en fait un nœud utile pour les études mécanistiques de la régulation immunitaire.
CD137 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNFRSF9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNFRSF9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNFRSF9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNFRSF9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.