Plásmido Doble Nickase (h) CD133: sc-418263-NIC

PROM1 codifica CD133 (prominina-1), una glucoproteína transmembrana de cinco pasos enriquecida en protrusiones de la membrana plasmática y microvellosidades, que contribuye a la organización de la membrana y a la polaridad celular. En tejidos humanos, CD133 marca compartimentos con características de células madre y progenitoras, y se utiliza con frecuencia para estudiar la heterogeneidad de estados celulares, los programas de autorrenovación y las trayectorias de diferenciación. La biología asociada a PROM1 se cruza con programas de señalización y transcripcionales vinculados a la actividad de Wnt/β-catenina, Notch y PI3K–AKT, así como con procesos que regulan la arquitectura epitelial y la dinámica vesicular. Se ha descrito una expresión alterada de CD133 en múltiples neoplasias malignas y en contextos de remodelación tisular, lo que respalda su relevancia para investigar la iniciación tumoral, la invasión y subpoblaciones resistentes a terapias, sin implicar utilidad clínica.

CD133 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PROM1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PROM1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PROM1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PROM1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.