Plasmide Double Nickase (h) CD133: sc-418263-NIC

PROM1 code pour CD133 (prominine‑1), une glycoprotéine transmembranaire à cinq domaines, enrichie dans les protrusions de la membrane plasmique et les microvillosités, qui contribue à l’organisation membranaire et à la polarité cellulaire. Dans les tissus humains, CD133 marque des compartiments de type cellules souches et progénitrices et est fréquemment utilisée pour étudier l’hétérogénéité des états cellulaires, les programmes d’auto-renouvellement et les trajectoires de différenciation. La biologie associée à PROM1 recoupe des programmes de signalisation et de transcription liés à l’activité des voies Wnt/β‑caténine, Notch et PI3K–AKT, ainsi que des processus qui gouvernent l’architecture épithéliale et la dynamique vésiculaire. Une expression altérée de CD133 a été rapportée dans de nombreuses tumeurs malignes et dans des contextes de remodelage tissulaire, ce qui étaye sa pertinence pour étudier l’initiation tumorale, l’invasion et des sous‑populations résistantes aux traitements, sans pour autant impliquer une utilité clinique.

CD133 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PROM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PROM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PROM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PROM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.