Plásmido CRISPR de Activación (m) CD133: sc-437381-ACT

Prom1 codifica la glicoproteína de membrana pentaspan CD133, un marcador de superficie celular enriquecido en compartimentos de células madre y progenitoras de múltiples tejidos de ratón. CD133 se localiza en protrusiones de la membrana plasmática y se ha relacionado con la regulación de la polaridad celular, la organización de la membrana y programas de señalización que influyen en la autorrenovación y el compromiso de linaje, incluidos procesos asociados a Wnt/β-catenina, PI3K–AKT, Notch y Hedgehog. La expresión alterada de PROM1/CD133 se asocia con frecuencia con fenotipos de células iniciadoras de tumor, potencial metastásico y firmas de resistencia a terapias en diversos modelos de cáncer, y también se estudia en el contexto de la regeneración tisular y el neurodesarrollo. En sistemas de ratón, Prom1 proporciona una herramienta manejable para investigar estados tipo célula madre, la organización epitelial y trayectorias de diferenciación mediante enfoques de perturbación genética.

CD133 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Prom1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD133 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Prom1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Prom1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD133. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Prom1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD133 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD133 en células tumorales con expresión de Prom1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.