Plásmido CRISPR de Activación (h) CD100: sc-405956-ACT

SEMA4D (CD100) es una semaforina transmembrana ampliamente expresada en linajes inmunitarios y neuronales que señaliza principalmente a través de receptores de la familia plexina-B y de CD72 para coordinar la comunicación célula–célula. CD100 influye en la remodelación del citoesqueleto, la migración y la adhesión mediante vías de señalización asociadas a GTPasas de la familia Rho y a MAPK, modulando la activación de linfocitos, la función de células dendríticas y las interacciones neuroinmunes. En el microambiente tumoral y en tejidos inflamados, las señales mediadas por SEMA4D pueden regular la infiltración inmunitaria, las respuestas angiogénicas y la remodelación del estroma, lo que la convierte en un nodo molecular útil para el estudio de vías en biología del cáncer, neuroinflamación y modelos relevantes de autoinmunidad. Su expresión regulada también proporciona un indicador para estudios del control transcripcional y de la dinámica de señalización receptor–ligando en células humanas.

CD100 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SEMA4D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD100 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SEMA4D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SEMA4D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD100. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SEMA4D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD100 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD100 en células tumorales con expresión de SEMA4D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.