CCL27 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422842

概要

Ccl27a はケモカイン CCL27（CTACK とも呼ばれる）をコードしており、皮膚に関連する CC ケモカインとして、CCR10 を発現する T 細胞を上皮部位へ導く勾配を形成することで、白血球のトラフィッキングの調整に寄与します。CCL27 は皮膚微小環境におけるケモカイン駆動性の細胞移動、免疫監視、炎症シグナル伝達に関与し、角化細胞と浸潤リンパ球の相互作用にも影響します。CCL27–CCR10 軸の活性が破綻すると、皮膚炎様の疾患過程モデルにおいて皮膚炎症や免疫細胞リクルートメントの変化と関連することが示されています。そのためマウス系では、組織選択的な走化性や上皮免疫調節の機構を解明する目的で Ccl27a が広く研究されています。

CCL27 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcl27a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccl27a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccl27aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CCL27タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CCL27シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccl27a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CCL27の機能に不可欠なCcl27aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccl27aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CCL27 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCCL27 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccl27a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CCL27 HDRプラスミド（m）および CCL27 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcl27aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcl27a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。