CCDC90A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406721

Übersicht

MCUR1 (auch bekannt als CCDC90A) kodiert ein Protein der inneren Mitochondrienmembran, das die mitochondriale Calciumaufnahme unterstützt, indem es den mitochondrialen Calcium-Uniporter-Komplex moduliert. Über die Regulation der Ca²⁺-Konzentration in der Matrix verknüpft CCDC90A die Calciumsignalgebung mit der oxidativen Phosphorylierung, der Aktivität von Enzymen des Citratzyklus (TCA-Zyklus) und der zellulären bioenergetischen Homöostase, mit nachgelagerten Effekten auf reaktive Sauerstoffspezies und Stressantworten. Störungen der MCUR1/CCDC90A-Funktion wurden mit einem veränderten mitochondrialen Stoffwechsel und einer erhöhten Anfälligkeit für mitochondriale Dysfunktion in Verbindung gebracht, was das Gen für Studien zu kardiometabolischem Stress, Neurobiologie und der metabolischen Anpassung von Krebszellen relevant macht. Als Knotenpunkt der mitochondrialen Signalübertragung wird es häufig in Signalwegen untersucht, die Calciumhandling, Apoptoseanfälligkeit und mitochondriale Qualitätskontrolle miteinander verbinden.

Das CCDC90A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MCUR1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MCUR1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MCUR1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CCDC90A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MCUR1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CCDC90A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MCUR1-Exone abzielen, die für die CCDC90A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MCUR1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CCDC90A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CCDC90A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MCUR1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CCDC90A HDR-Plasmid (h) und CCDC90A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MCUR1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MCUR1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.