Plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC8 (h): sc-406749

Présentation

CCDC8 (coiled-coil domain containing 8) code une protéine cytoplasmique à domaines coiled-coil impliquée dans la régulation des programmes de croissance et de survie cellulaires, avec des liens rapportés avec la signalisation sensible au stress et le contrôle de la capacité proliférative. Des études fonctionnelles suggèrent que CCDC8 peut influencer l’apoptose et des processus liés aux points de contrôle, la reliant à des voies qui façonnent l’homéostasie cellulaire et la susceptibilité à la transformation. Une expression altérée de CCDC8 ou sa perturbation ont été étudiées dans le contexte de la biologie tumorale, où des modifications de la régulation de la croissance et de la signalisation de survie sont des caractéristiques fréquentes. Ces attributs font de CCDC8 une cible utile pour disséquer les mécanismes qui couplent les fonctions de protéines du cytosquelette ou de type échafaudage à la transduction du signal et aux décisions de destinée cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCDC8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCDC8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCDC8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CCDC8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCDC8 pour l'étude de la signalisation de CCDC8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CCDC8 essentiels à la fonction de CCDC8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCDC8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CCDC8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CCDC8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCDC8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CCDC8 plasmide HDR (h) et le CCDC8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCDC8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCDC8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.