Particules Lentivirales d'Activation (h) CCDC23: sc-415702-LAC

SVBP code la petite protéine de liaison à la vasohibine, également appelée CCDC23, qui agit comme cofacteur essentiel des protéines vasohibines et soutient leur activité de carboxypeptidase de la tubuline, responsable de la détyrosination de l’α-tubuline. En régulant cette modification post-traductionnelle des microtubules, SVBP influence la dynamique du cytosquelette, l’organisation du fuseau mitotique, le trafic intracellulaire et la migration cellulaire. Une détyrosination altérée des microtubules a été impliquée dans des défauts de division cellulaire et des phénotypes liés à la motilité, établissant un lien mécanistique avec des voies pertinentes pour la biologie du cancer et les processus neurodéveloppementaux. Ainsi, la modulation de l’expression de SVBP/CCDC23 est utile pour étudier la signalisation dépendante des microtubules, le transport des organites et le remodelage du cytosquelette dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CCDC23 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SVBP dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CCDC23 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SVBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CCDC23. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SVBP ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.