Plasmide CRISPR d'Activation (h) CCDC23: sc-415702-ACT

SVBP code pour CCDC23, une protéine contenant un domaine en coiled-coil impliquée dans des processus associés au centrosome et l’organisation des microtubules, avec des rôles décrits dans la régulation du fuseau mitotique et la ségrégation des chromosomes. Par ces fonctions, CCDC23 est susceptible d’influencer la progression du cycle cellulaire et les voies de stabilité du génome, fréquemment perturbées dans les contextes de maladies prolifératives. Une expression altérée ou une dérégulation de facteurs centrosomaux et associés au fuseau est souvent liée à l’aneuploïdie et aux réponses au stress cellulaire, ce qui rend SVBP/CCDC23 pertinent pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans des modèles apparentés. Sa localisation intracellulaire et ses caractéristiques d’échafaudage prédites en font également un point d’entrée utile pour explorer les réseaux d’interactions protéiques qui gouvernent la mitose et la dynamique du cytosquelette.

CCDC23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SVBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CCDC23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SVBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SVBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CCDC23. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SVBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CCDC23 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CCDC23 dans les cellules tumorales présentant une expression de SVBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.