Plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC111 (h): sc-404310

Présentation

PRIMPOL (également connu sous le nom de CCDC111) code PrimPol, une primase–polymérase qui favorise la tolérance aux dommages de l’ADN en réamorçant la synthèse d’ADN en aval des lésions et en aidant au redémarrage des fourches de réplication. Cette activité soutient la stabilité du génome pendant la phase S et s’inscrit à l’interface de voies impliquées dans la réponse au stress réplicatif, la réparation post-réplication et le maintien de l’intégrité de l’ADN mitochondrial et nucléaire. Un stress réplicatif dérégulé et un contournement des lésions défaillant sont associés à l’accumulation de mutations et à l’instabilité chromosomique, faisant de PRIMPOL une cible pertinente pour l’étude des mécanismes qui influencent le maintien du génome lié au cancer. En outre, la fonction de PRIMPOL est souvent étudiée dans le contexte des dommages oxydatifs, des lésions induites par les UV et des événements de changement de polymérase lors de la reprise d’une fourche bloquée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC111 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRIMPOL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRIMPOL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRIMPOL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CCDC111.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRIMPOL pour l'étude de la signalisation de CCDC111, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRIMPOL essentiels à la fonction de CCDC111
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRIMPOL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CCDC111 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CCDC111 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRIMPOL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CCDC111 plasmide HDR (h) et le CCDC111 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRIMPOL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRIMPOL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.