CBX7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402903-ACT

CBX7 (Chromobox 7) ist ein Protein der Polycomb-Gruppe, das als Chromatin-Reader innerhalb des kanonischen PRC1 fungiert, indem es H3K27me3 erkennt und dazu beiträgt, eine stabile transkriptionelle Repression aufrechtzuerhalten. Über die Polycomb-vermittelte epigenetische Regulation beeinflusst CBX7 die Kontrolle des Zellzyklus, die Linienfestlegung, die Seneszenz sowie die langfristige Aufrechterhaltung von Programmen der Zellidentität. Eine veränderte CBX7-Expression oder eine dysregulierte PRC1-Aktivität wurde mit aberranten Genstilllegungsnetzwerken in Verbindung gebracht, die in verschiedenen Krebskontexten sowie bei entwicklungs- und altersassoziierten Phänotypen beobachtet werden. Als nukleärer Chromatinregulator wird CBX7 häufig in Signalwegen untersucht, die das transkriptionelle Gedächtnis und die Chromatinkondensation steuern.

CBX7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CBX7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CBX7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CBX7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CBX7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CBX7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CBX7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CBX7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CBX7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CBX7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.