Plasmide CRISPR d'Activation (h) CBX4: sc-403903-ACT

CBX4 (chromobox 4) est une protéine du groupe Polycomb qui agit comme lecteur épigénétique de marques d’histones répressives et contribue à un silençage transcriptionnel stable. En tant que composant associé à l’activité des complexes Polycomb répressifs, CBX4 participe à la régulation de la compaction de la chromatine, du contrôle du cycle cellulaire, des programmes de différenciation et du maintien de l’identité cellulaire via une répression génique de longue durée. CBX4 possède également une activité de ligase E3 de SUMO, capable de moduler la fonction de facteurs de transcription et les réponses de la chromatine associées aux dommages de l’ADN. Une expression ou une activité dérégulée de CBX4 a été liée à des modifications de la prolifération et à des états épigénétiques aberrants observés en cancérologie et dans d’autres troubles impliquant une mauvaise régulation de la transcription.

CBX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CBX4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CBX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CBX4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CBX4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CBX4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CBX4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CBX4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CBX4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CBX4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.