Plasmide Double Nickase (h) CBP20: sc-404124-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CBP20 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CBP20 Double Nickase (h) et le plasmide CBP20 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NCBP2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CBP20 Antibody (B-1): sc-137123
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CBP20 | sc-404124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CBP20 | sc-404124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NCBP2 code CBP20, la petite sous-unité du complexe nucléaire de liaison à la coiffe (cap-binding complex), qui reconnaît la coiffe 7‑méthylguanosine des transcrits naissants synthétisés par l’ARN polymérase II. Avec NCBP1/CBP80, CBP20 assure le couplage entre la reconnaissance de la coiffe et le traitement co‑transcriptionnel de l’ARN, notamment l’épissage du pré‑ARNm, la formation de l’extrémité 3′, l’export de l’ARN via des voies dépendantes de TREX, ainsi que des mécanismes de surveillance tels que la dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (NMD). Par ces fonctions, CBP20 contribue à coordonner des programmes d’expression génique influençant le contrôle du cycle cellulaire, les réponses au stress et la signalisation immunitaire innée liée au métabolisme de l’ARN. Une dérégulation du traitement et de l’export des ARN dépendants de la coiffe est fréquemment observée dans des états transcriptomiques associés à des maladies, ce qui fait de NCBP2 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biogenèse de l’ARN et du transport nucléocytoplasmique.
CBP20 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NCBP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NCBP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NCBP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NCBP2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.