Plasmide CRISPR/Cas9 KO CBP20 (h): sc-404124

Présentation

NCBP2 code CBP20, la petite sous-unité du complexe nucléaire de liaison à la coiffe, qui reconnaît la coiffe 7‑méthylguanosine des transcrits naissants produits par l’ARN polymérase II. En couplant la reconnaissance de la coiffe au traitement de l’ARN, CBP20 soutient l’épissage des pré‑ARNm, la formation de l’extrémité 3′, l’export nucléaire et des voies de surveillance de l’ARN, dont la dégradation des ARNm médiée par les codons stop prématurés (NMD). Par ces fonctions, NCBP2 contribue à coordonner les programmes d’expression génique et l’intégrité du transcriptome lors de la croissance cellulaire et des réponses au stress. La dérégulation du métabolisme de l’ARN dépendant de la coiffe et du contrôle qualité des ARNm a été associée à des états transcriptionnels oncogéniques et à des phénotypes neurodéveloppementaux, faisant de NCBP2 un nœud pertinent pour étudier des mécanismes de traitement de l’ARN liés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CBP20 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NCBP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NCBP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NCBP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CBP20.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NCBP2 pour l'étude de la signalisation de CBP20, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NCBP2 essentiels à la fonction de CBP20
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NCBP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CBP20 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CBP20 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NCBP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CBP20 plasmide HDR (h) et le CBP20 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NCBP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NCBP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.