Plasmide Double Nickase (h) Cbl: sc-400561-NIC

CBL code pour Cbl, une ligase E3 d'ubiquitine et protéine adaptatrice qui coordonne la diminution des récepteurs activés et des tyrosine kinases non réceptrices. Grâce à son domaine TKB et à son activité d'ubiquitination dépendante du doigt RING, Cbl favorise le trafic et la dégradation des complexes de signalisation médiés par l'ubiquitine, modulant les réponses de voies telles que EGFR/RTK, MAPK/ERK, PI3K–AKT et la signalisation des récepteurs immunitaires. Cbl contribue également à l'endocytose, au contrôle qualité des protéines et à la régulation par rétroaction de l'intensité et de la durée de la transduction du signal. La dérégulation ou les mutations de CBL sont associées à une signalisation aberrante des tyrosine kinases et à la biologie des maladies hématologiques, ce qui en fait un nœud utile pour explorer les réseaux de signalisation oncogéniques et les circuits de régulation des cellules immunitaires.

Cbl Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CBL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CBL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CBL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CBL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.