CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401054-ACT

CNR2 kodiert den Cannabinoid-Rezeptor 2 (CB2), einen Gi/o-gekoppelten GPCR, der überwiegend in Immun- und hämatopoetischen Zelllinien exprimiert wird und den Entzündungsgrundtonus sowie die Migration von Immunzellen moduliert. Nach Aktivierung hemmt CB2 die Adenylylcyclase, wodurch das cAMP/PKA-Signal reduziert wird, und kann MAPK/ERK- sowie PI3K/AKT-Signalwege aktivieren; dadurch werden Zytokinproduktion, Chemotaxis und Überlebensprogramme beeinflusst. Die CB2-Signalgebung überschneidet sich mit Netzwerken lipidischer Mediatoren und dem Endocannabinoid-Stoffwechsel und beeinflusst so Aktivierungszustände von Makrophagen und Mikroglia sowie umfassendere angeborene und adaptive Immunantworten. Eine dysregulierte CNR2-Expression oder -Signalübertragung wurde mit immunvermittelten Entzündungen, neuroinflammatorischen Prozessen und der Dynamik des Tumor-Immun-Mikromilieus in Verbindung gebracht, was seine Eignung als mechanistisches Ziel in der immunologischen und neurobiologischen Forschung unterstreicht.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CNR2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CNR2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CNR2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CNR2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CNR2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.