Plasmide Double Nickase (m) CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1: sc-419722-NIC

Cnr1 code pour le récepteur cannabinoïde 1 (CB1/CNR1), un GPCR couplé à Gi/o qui répond aux endocannabinoïdes tels que l’anandamide et le 2‑AG afin de réguler la transmission synaptique et l’excitabilité neuronale. La signalisation via CB1 module l’adénylyl cyclase et l’activité cAMP/PKA, active les cascades MAPK/ERK et influence le fonctionnement des canaux Ca²⁺ et K⁺, façonnant ainsi la libération de neurotransmetteurs dans de multiples circuits cérébraux. Chez la souris, Cnr1 est au cœur du dialogue neuro-immunitaire et métabolique, avec des effets en aval sur la régulation de l’appétit, le traitement de la récompense, la réactivité au stress et l’équilibre énergétique. Les altérations de l’activité de la voie CB1 sont fréquemment étudiées dans des modèles de phénotypes neuropsychiatriques, de traitement de la douleur, de susceptibilité aux crises et de dysfonction métabolique liée à l’obésité, ce qui en fait une cible d’intérêt pour de nombreuses applications de recherche mécanistique.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cnr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cnr1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cnr1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cnr1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.