Plásmido Doble Nickase (h) CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1: sc-400648-NIC

CNR1 codifica el receptor cannabinoide 1 (CB1), un GPCR acoplado a Gi/o que responde a los endocannabinoides para regular la actividad de la adenilil ciclasa, la señalización cAMP/PKA, la conductancia de canales iónicos y las vías downstream relacionadas con MAPK/ERK y PI3K. CB1 se expresa ampliamente en el sistema nervioso y contribuye a la transmisión sináptica, la liberación de neurotransmisores y la plasticidad dependiente de la actividad, con funciones adicionales en procesos metabólicos periféricos y relacionados con el sistema inmunitario. La alteración de la señalización CNR1/CB1 se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y neurodegenerativos, el procesamiento del dolor y la desregulación metabólica, lo que lo convierte en un nodo frecuentemente estudiado en la farmacología de GPCR y en los circuitos neuromoduladores. En modelos celulares, la perturbación de CNR1 se utiliza para investigar la desensibilización/internalización del receptor, el sesgo de acoplamiento a proteínas G y el crosstalk entre vías que afecta la excitabilidad neuronal y la señalización inflamatoria.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CNR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CNR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CNR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CNR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.