Particules Lentivirales d'Activation (h) caveolin-3: sc-400569-LAC

CAV3 code la cavéoline‑3, une protéine intégrale de membrane enrichie dans le muscle, qui sert d’échafaudage aux cavéoles et organise des microdomaines de signalisation au niveau du sarcolemme. La cavéoline‑3 régule le trafic membranaire, la mécanotransduction et l’homéostasie lipidique, et elle module des voies telles que la signalisation du récepteur de l’insuline/PI3K–AKT, la signalisation de l’oxyde nitrique et la localisation des canaux ioniques. Par ses interactions avec le complexe dystrophine–glycoprotéines et des éléments du cytosquelette, la cavéoline‑3 favorise la stabilité membranaire lors de la contraction et contribue au couplage excitation–contraction. Une dérégulation ou des mutations de CAV3 sont associées à des phénotypes musculaires squelettiques et cardiaques, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la biologie des cavéoles, l’intégrité du sarcolemme et la signalisation de réponse au stress dans des cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales caveolin-3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CAV3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales caveolin-3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CAV3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de caveolin-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CAV3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.