Plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin Z (h): sc-403244

Présentation

CTSZ code la cathépsine Z (cathépsine X), une protéase cystéine lysosomale qui participe au renouvellement intracellulaire des protéines et au traitement des peptides au sein du système endo-lysosomal. La cathépsine Z peut moduler l’adhésion et la migration cellulaires via des interactions impliquant son motif RGD et en façonnant des réseaux de protéases qui remodèlent le milieu extracellulaire. Son activité est liée au traitement des antigènes et à la signalisation inflammatoire dans les cellules immunitaires, reliant ainsi CTSZ à des voies qui gouvernent les réponses immunitaires innée et adaptative. Une expression ou une activité dérégulée de CTSZ a été associée à des phénotypes d’invasion tumorale ainsi qu’à des contextes neuro-inflammatoires ou neurodégénératifs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la protéostasie et des microenvironnements immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin Z (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CTSZ dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CTSZ, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CTSZ à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cathepsin Z.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CTSZ pour l'étude de la signalisation de cathepsin Z, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CTSZ essentiels à la fonction de cathepsin Z
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CTSZ pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cathepsin Z plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cathepsin Z plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CTSZ. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cathepsin Z plasmide HDR (h) et le cathepsin Z (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CTSZ pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CTSZ définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.