cathepsin S Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419881

Descripción general

Ctss codifica la catepsina S de ratón, una proteasa cisteínica lisosomal con una marcada expresión en células presentadoras de antígeno, donde impulsa el procesamiento proteolítico de proteínas internalizadas. La catepsina S es un componente clave de la vía de presentación de antígenos por MHC de clase II, ya que escinde la cadena invariante y permite la carga de péptidos, conectando la proteostasis endolisosomal con la activación de la inmunidad adaptativa. Más allá del procesamiento antigénico, la catepsina S contribuye al recambio de la matriz extracelular y a la señalización inflamatoria en linajes mieloides, lo que respalda estudios sobre el tráfico de leucocitos y la remodelación tisular. La actividad desregulada de CTSS se ha asociado con patología mediada por el sistema inmunitario y estados inflamatorios crónicos, lo que motiva investigaciones mecanísticas en modelos de inmunología e inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO cathepsin S (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ctss en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ctss junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ctss tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cathepsin S.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ctss para la investigación de la señalización de cathepsin S, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ctss críticos para la función de cathepsin S
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ctss para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido cathepsin S CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido cathepsin S CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ctss. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cathepsin S (m) y el plásmido HDR cathepsin S (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ctss para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ctss definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.