Plasmide CRISPR d'Activation (h) cathepsin G: sc-402663-ACT

CTSG code la cathepsine G, une protéase à sérine des neutrophiles et des monocytes, stockée dans les granules azurophiles et libérée lors de la dégranulation afin de moduler les réponses immunitaires innées. La cathepsine G contribue à l’activité antimicrobienne et au remodelage de la matrice extracellulaire en clivant une large gamme de substrats protéiques, à l’interface avec la signalisation inflammatoire, la chimiotaxie leucocytaire et l’équilibre protéases–antiprotéases dans les environnements myéloïdes. Une activité dérégulée de CTSG a été associée à des lésions tissulaires induites par les neutrophiles et à une inflammation chronique, et des profils d’expression altérés sont étudiés dans les hémopathies malignes myéloïdes et les troubles à médiation immunitaire. En tant que composant des réseaux de protéases granuleuses, CTSG est fréquemment étudié aux côtés de l’élastase et de la protéinase 3 dans des voies impliquées dans la défense de l’hôte, l’inflammation vasculaire et les interactions tumeur–système immunitaire.

cathepsin G Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CTSG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cathepsin G Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CTSG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CTSG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cathepsin G. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CTSG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cathepsin G au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cathepsin G dans les cellules tumorales présentant une expression de CTSG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.