Plasmide Double Nickase (m) cathepsin D: sc-419875-NIC

Le gène murin *Ctsd* code la cathepsine D, une endopeptidase aspartique lysosomale qui assure une protéolyse à la fois massive et sélective des cargos endocytés et autophagiques après leur acheminement vers le système endo‑lysosomal. En régulant le renouvellement des protéines, la biogenèse des lysosomes et le traitement des antigènes, la cathepsine D influence des programmes d’homéostasie cellulaire liés au flux autophagie–lysosome, au trafic endosomal et aux réponses au stress. Des altérations de l’activité ou de l’expression de *CTSD* ont été associées à la neurodégénérescence et à des phénotypes de surcharge lysosomale, ainsi qu’à la biologie tumorale via des effets sur le remodelage de la matrice extracellulaire et la signalisation de survie dans le microenvironnement. *Ctsd* est donc largement utilisé comme nœud mécanistique pour étudier la dysfonction lysosomale, l’effondrement de la protéostasie et la signalisation inflammatoire dans des modèles murins.

cathepsin D Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ctsd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ctsd. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ctsd. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ctsd.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.