Plasmide Double Nickase (h) cathepsin D: sc-400207-NIC

CTSD code la cathepsine D, une endopeptidase aspartique lysosomale qui assure la protéolyse globale et sélective des cargaisons endocytées et autophagiques, contribuant ainsi à l'homéostasie des lysosomes et au recyclage des nutriments cellulaires. La cathepsine D participe à la maturation endo-lysosomale, au traitement des antigènes et au renouvellement des composants de la matrice extracellulaire après leur internalisation, reliant l'activité de CTSD à la protéostasie, au fonctionnement du système autophagie‑lysosome et aux réponses au stress. Une expression ou un trafic de CTSD dérégulés ont été associés à une altération de l'intégrité lysosomale, à des processus neurodégénératifs et au remodelage du microenvironnement lié aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l'étude de la survie cellulaire et de la signalisation inflammatoire. CTSD humain est donc largement utilisé comme gène modèle pour disséquer les voies dépendantes des lysosomes et les phénotypes pilotés par des protéases dans des cellules cultivées.

cathepsin D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTSD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTSD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTSD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTSD.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.