Plasmide CRISPR d'Activation (m) CASZ1: sc-427520-ACT

Le gène murin *Casz1* code le facteur de transcription à doigts de zinc CASZ1, un régulateur nucléaire de l’expression génique qui contribue à la spécification des lignages, à la différenciation cellulaire et au maintien des programmes développementaux. L’activité de CASZ1 s’inscrit dans des réseaux transcriptionnels qui orchestrent un contrôle de la prolifération et de la maturation dépendant de la chromatine, favorisant une régulation contextuelle de la progression du cycle cellulaire et de la structuration des tissus. Une expression altérée de CASZ1 ou des perturbations de sa régulation ont été associées à des états de croissance et de différenciation déréglés, faisant de *Casz1* un nœud pertinent pour étudier les circuits de régulation génique du développement et la reprogrammation transcriptionnelle liée aux maladies.

CASZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Casz1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CASZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Casz1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Casz1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CASZ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Casz1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CASZ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CASZ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Casz1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.