CASZ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-427520-ACT

O gene Casz1 de camundongo codifica o fator de transcrição CASZ1, do tipo “zinc finger”, um regulador nuclear da expressão gênica que contribui para a especificação de linhagens celulares, a diferenciação celular e a manutenção de programas de desenvolvimento. A atividade de CASZ1 interage com redes transcricionais que modulam o controle da proliferação e da maturação dependente da cromatina, sustentando a regulação dependente do contexto da progressão do ciclo celular e do padrão de organização dos tecidos. Alterações na expressão de CASZ1 ou perturbações em sua regulação têm sido associadas a estados de crescimento e diferenciação desregulados, tornando Casz1 um ponto útil para o estudo de circuitos regulatórios gênicos do desenvolvimento e de reprogramação transcricional relevante para doenças.

CASZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Casz1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CASZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Casz1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Casz1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CASZ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Casz1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CASZ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CASZ1 em células tumorais com expressão de Casz1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.