Plasmide CRISPR d'Activation (h) CASZ1: sc-404756-ACT

CASZ1 (castor zinc finger 1) code un facteur de transcription humain qui se fixe à l’ADN via plusieurs domaines « doigt de zinc » C2H2 afin de réguler des programmes d’expression génique contrôlant la détermination du destin cellulaire, la différenciation et la morphogenèse tissulaire. L’activité de CASZ1 a été associée à des réseaux de signalisation du développement qui façonnent les lignages neuronaux et cardiovasculaires, notamment des voies influençant la progression du cycle cellulaire et l’organisation du cytosquelette. Une expression dérégulée de CASZ1 ou une altération des circuits régulateurs est associée à des phénotypes pertinents pour la maladie, tels que des états de différenciation altérés et une prolifération aberrante, avec une implication rapportée dans la biologie du neuroblastome et le développement vasculaire. En tant que régulateur transcriptionnel endogène, CASZ1 est largement étudié pour comprendre comment des programmes transcriptionnels restreints à certaines lignées s’articulent avec la régulation de la chromatine et les réseaux de gènes du développement.

CASZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASZ1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CASZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASZ1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASZ1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CASZ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASZ1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CASZ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CASZ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CASZ1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.