Plasmide Double Nickase (h) caspase-8: sc-400147-NIC

CASP8 code la caspase‑8, une caspase initiatrice qui couple la signalisation des récepteurs de mort à l'exécution de l'apoptose via l'activation protéolytique de caspases effectrices en aval. Elle constitue un élément central de l'apoptose extrinsèque médiée par des récepteurs de la famille TNFRSF tels que FAS et TNFR1, et elle interagit également avec des voies de l'immunité innée qui régissent la communication avec l'inflammasome et la maturation des cytokines. L'activité de la caspase‑8 influence l'équilibre entre apoptose, nécroptose et mort cellulaire inflammatoire en modulant la signalisation RIPK1/RIPK3 et l'assemblage de complexes dépendant de cFLIP. La dérégulation de CASP8 a été associée à une homéostasie immunitaire altérée, à une apoptose défectueuse des lymphocytes et à des mécanismes de survie des cellules tumorales qui modifient la sensibilité aux ligands des récepteurs de mort.

caspase-8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CASP8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CASP8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CASP8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CASP8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.