Plasmide Double Nickase (h) caspase-6: sc-402563-NIC

CASP6 code la caspase-6, une protéase à cystéine-aspartate qui agit comme caspase « exécutrice » dans la signalisation apoptotique et peut également contribuer à une protéolyse non apoptotique affectant des substrats du cytosquelette et du noyau. La caspase-6 est activée en aval des voies de mort intrinsèque et extrinsèque et participe à des cascades protéolytiques qui façonnent le démantèlement cellulaire, les interactions avec les réponses inflammatoires et les réponses au stress cellulaire. Une activité dérégulée de CASP6 a été associée à une vulnérabilité anormale des neurones et des cellules immunitaires, avec des liens rapportés avec la neurodégénérescence et d’autres pathologies dans lesquelles une apoptose ou une protéostasie altérées sont impliquées. Ces caractéristiques font de CASP6 une cible utile pour étudier les hiérarchies des réseaux de caspases, la spécificité des substrats et les décisions de destin cellulaire dans des systèmes modèles humains.

caspase-6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CASP6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CASP6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CASP6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CASP6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.