Plasmide Double Nickase (m) caspase-3: sc-419466-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) caspase-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide caspase-3 Double Nickase (m) et le plasmide caspase-3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Casp3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: caspase-3 p11 Antibody (C-6): sc-271759
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) caspase-3 | sc-419466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) caspase-3 | sc-419466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Casp3 code la caspase‑3, une protéase effectrice centrale de l’apoptose, activée en aval des voies intrinsèques mitochondriales et des voies extrinsèques dépendantes des récepteurs de mort. Une fois maturée par les caspases initiatrices, la caspase‑3 clive de nombreux substrats, entraînant la condensation de la chromatine, la fragmentation de l’ADN, la formation de bourgeonnements membranaires et la génération de corps apoptotiques. Dans des modèles murins, l’activité de Casp3 façonne le développement et l’homéostasie des tissus et influence les réponses au stress cellulaire, à la cytotoxicité immunitaire, ainsi qu’aux processus neurodégénératifs ou inflammatoires où une mort cellulaire dérégulée contribue à la pathologie. Comme la caspase‑3 constitue un point de convergence des signaux pro‑apoptotiques, la perturbation de Casp3 est largement utilisée pour analyser les interactions entre l’apoptose, les voies de survie compensatoires et la nécrose régulée.
caspase-3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Casp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Casp3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Casp3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Casp3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.